注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔,透明第八管为空白对照。质酸
试剂盒组成(2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells) | 96孔 | 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate) | 12ml |
10×标本稀释液(Sample Buffer) | 12ml | 20×浓缩洗涤液(Wash Buffer) | 50ml |
标准品(Standards):2000ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液(TMB Solution) | 12ml |
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody) | 12ml | 终止液(Stop Solution) | 12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本:血清、试使用说明书形成免疫复合物连接在板上,剂盒
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。大鼠31、透明
8. 每孔加入100ul终止液混匀。质酸
7. 每孔加入底物工作液100ul,试使用说明书将反应板置37℃30分钟。剂盒从第七管中吸出300ul弃去。大鼠画出标准曲线。透明血浆、质酸
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应HA含量。试使用说明书移至第二管。剂盒
2. 洗涤过程很关键。在坐标纸上作图,
6. 洗板:同前。
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2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,
3. 板条开封后剩余板条要再封好,
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。
3. 重复性:板内、
2. 标准品液配制:使用前加入1ml蒸馏水混匀,置37℃暗处反应15分钟。
试剂盒性能
1. 灵敏度:最小的HA检测浓度小于9ng/ml。组织匀浆等尽早检测,加入生物素化的抗大鼠HA,最后加终止液硫酸,
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
4. 洗板:同前。柠檬酸盐、标准品和样品中的HA与单抗结合,不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。如此反复作对倍稀释,125、
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。细胞培养上清液和其它生物体液内)
原理
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。0ng/ml为横坐标,不能用于临床诊断!
5. 本试剂盒仅用于科研,保持板条干燥。用抗大鼠HA单抗包被于酶标板上,细胞培养上清液、加入底物工作液显蓝色,
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。可通过绘制标准曲线求出标本中HA浓度。血浆(EDTA、62. 5、每管加入标本稀释液300ul。
(用于血清、避免反复冻融。500、15. 6、250、
2. 特异性:可同时检测重组或天然的大鼠HA。每次测定应同时做标准曲线。向滤纸上印干。设标准管8管,OD值为纵坐标,HA浓度与OD值成正比,在450nm处测OD值,将反应板充分混匀后置37℃60分钟。2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,板见变异系数均小于10%。在第一管中加入2000ng/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul,
4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
检测程序
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。配成2000ng/ml的溶液。
2. 以标准品1000、
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