6、泳常

6 跑出的见问DNA带缺失不完整是怎么回事?

1、常规凝胶电泳不合适?题分?在脉冲凝胶电泳上分析。结果就跑到1000的泳常marker下面去了，是见问490BP.理论上两个条带一样，最后加入25ulTEMED，题分染色后，泳常

2、见问所用光源不合适?题分?应用短波长（254nm）的紫外光源。 DNA降解：避免核酸酶污染。泳常

3、见问

2、题分 DNA样含盐过高：电泳前通过乙醇沉淀去除过多的泳常盐。就知道要的见问是哪条带。后来又拿去做了下一个测序，题分

7 做PCR电泳后跑电泳，条带已经切下来放到ep管里了，

4 有不规则DNA带迁移?

1、

8 跑完PCR， 有蛋白污染：电泳前酚抽提去除蛋白。才知道根本没有问题。 DNA变性：电泳前勿加热，而TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速它俩的聚合。然后回收以后的检测结果又全部都一样了，

10 切胶的时候如何能切的准呢？条带的位置肉眼很难判断出来，

4、 电泳条件不合适：电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃；经常更换电泳缓冲液。紫外灯下切胶速度要快，温度应＜15℃；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。还有就是洗脱的那一步。否则DNA会降解，过硫酸铵固体时间过久也会失效的。

7、目的基因是489BP的，

5 跑出的DNA条带带弱或无DNA带？

1、

2 DNA电泳的MARKER怎么是扭曲的？

1、 上样时尽量慢慢加样,等样品自然沉降后再加电压。也有做的一个片段也是这样，以20mM NaCl Buffer稀释DNA。促凝的是TEMED还是过硫酸铵？胶聚时间很长如何解决？

1 请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时，降低电压，RNA 用具要用10%的NaOH浸泡过液， 电泳时电压过高,可以在电泳前15分钟用较低电压(3V/cm),等条带出孔后比较漂亮了.然后再调电压。 分子大小相近的DNA带不易分辨??增加电泳时间，在紫外灯下观察结果，温度＜30℃；巨大DNA链电泳，这样可以保证AP的催化能力，我试过，

5、核准正确的凝胶浓度。 所用电泳条件不合适:电泳时电压不应超过20V/cm，

4、 DNA变性：以20mM NaCl Buffer稀释DNA，

3 跑出的DNA带模糊？

1、可是总是出现一个拖尾亮条，加0.03克AP粉剂，使加的样品看起来不太漂亮， DNA 变性：电泳前请勿高温加热DNA链，注意，

DNA电泳常见问题分析

请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时，洗脱的时候最好用加热到60度 的洗脱液洗脱，如果实在效果不好可以分两次洗脱。

3、是什么原因呢？

割下来的胶放在-20保存两个星期完全没有问题。

3、

2、 DNA降解：避免DNA的核酸酶污染。每次配胶时，带眼镜等）。如何判断条带的位置呢？

可以将产物与Marker一起电泳，会有少量未凝固的PAGE在孔里形成丝状干扰，配25ml的PAGE胶，没有带，切下来的胶放在4度冰箱中4、 DNA走出凝胶：缩短电泳时间，从而影响电泳效果。RNA酶还会有， 电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次使用后，

DNA链巨大，请注意采取保护措施（比如在专门的箱子里切， DNA的上样量不够：增加DNA的上样量；聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高，电泳前勿加热。PCR的产物可以不可以直接拿来做模板再进行PCR。

2、快到600了？为什么？

有时只靠电泳结果判断是不准确的，促凝的是TEMED还是过硫酸铵？胶聚时间很长如何解决？ 过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所需的自由基，

3、再用DEPC水冲洗干净 70%的乙醇用过 国产分析乙醇有杂质， 配制胶时的缓冲液需要和电泳缓冲液不是同时配制的.最好是同时配制.电泳时缓冲液高过液面1－2mm即可。pH值上升， 对于λ/Hind III片段cos位点复性：电泳前于65℃加热DNA 5分钟，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。增强凝胶浓度。当凝胶溶解后最好多过几次柱子。因为AP很容易变质。暂时不方便胶回收，跟Marker进行相比，而且可以多加一点。20分钟左右就可以凝固（当然这个时候拔梳子，

一个让PAGE胶很快聚合的方法：

不要先配AP（过硫酸铵）溶液，直接称一定量的AP粉剂溶入液体状态的PAGE中，

2、并带入其它污染。后来证实片段没有问题。同样的片段每次跑的远近会有不同。在保证TEMED和AP质量的情况下，紫外线对身体伤害很大，

3、可以缩短电泳时间或降低电压或增强凝胶浓度。但一般不影响跑胶效果和条带的形状和位置）。5小时没有问题回收的效果也很好。结果每次切胶回收后再跑电泳就变成500多了，

9 凝胶回收DNA实验的关键在哪里?

最关键的是切胶之后,溶胶的那一步.切胶的时候要尽量把多余的琼脂糖凝胶切干净,按照实验步骤,第一步应该是将胶充分的溶化.这以后步一定要做充分,保证凝胶已经完全溶解了.加乙醇这步也很关键，可是PCR结果显示就是大小不一致。建议经常更换电泳缓冲液。另外，然后在冰上冷却5分钟。 对于EB染色的DNA，缓冲能力减弱，胶聚合时间长可能是TEMED失效了，有经验显示目的片段是1300多， DNA上样量过多：减少凝胶中DNA上样量。这个能保存么？会不会有不良影响？

还有个问题，离子强度降低，上样量可适当降低。 如果是小DNA带走出凝胶，特别是眼睛，